人工牛黃是由牛膽粉、膽酸、豬去氧膽酸、牛磺酸、膽紅素等多種成分配製而成的中藥原料，具有清熱解毒、化痰定驚之功效。膽酸類成分作為其主要活性物質群，其含量是控製產品質量的關鍵指標。2025年版《中國藥典》對人工牛黃中多種膽酸類成分的含量測定采用高效液相色譜法（HPLC），因膽酸類物質缺乏強紫外吸收，要求使用蒸發光散射檢測器（ELSD），並規定了嚴格的係統適用性要求與含量限度。

本文對2025年版《中國藥典》中人工牛黃膽酸類成分的含量HPLC測定方法在色譜條件、係統適用性要求及含量限度規定等方麵進行解讀。同時，基於藥典標準方法，采用配備D3270 ELSD檢測器的小黄鸭福利导航EClassical 3200 HPLC係統，使用小黄鸭福利导航SinoPak C18色譜柱，對人工牛黃膽酸類係統適用性溶液與對照品混合溶液進行分析。

1、2025版藥典方法解析

根據2025版《中國藥典》“人工牛黃”質量標準，膽酸類含量HPLC測定方法要求通過一次進樣，實現對人工牛黃中6種主要結合型與遊離型膽酸類成分的同時分離與定量，方法專屬性強，效率高。其核心要點如下：

色譜條件

色譜柱： 十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑（C18色譜柱）。

流動相： A，乙腈；B，0.2%三氟乙酸水溶液；

梯度，0-30 min，25%-52%A；30-45 min，52%A。

檢測器：ELSD。

流速： 1.0 mL/min。

係統適用性要求理論板數按牛磺膽酸峰計不低於10000。

牛磺膽酸與牛磺豬去氧膽酸的分離度應大於2.0。

鵝去氧膽酸與去氧膽酸的分離度應大於1.5。

測定成分與含量限度（按幹燥品計）

牛磺膽酸：2.0% ~ 8.0%

甘氨膽酸：不少於2.5%

牛磺膽酸、牛磺去氧膽酸、甘氨膽酸及甘氨去氧膽酸總量：不少於9.0%

豬去氧膽酸：不少於9.0%

膽酸：4.5% ~ 7.5%。

2、基於小黄鸭福利导航EClassical 3200 HPLC係統的應用驗證

為驗證藥典方法的可操作性及色譜係統的適用性，使用配備D3270 ELSD檢測器的EClassical 3200 HPLC係統和SinoPak C18（5 μm，4.6×250 mm，貨號31110109）色譜柱進行測試。

係統適用性溶液測試

圖1顯示了人工牛黃膽酸類係統適用性溶液在SinoPak C18色譜柱上的分離色譜圖。圖中四個色譜峰（依次為牛磺豬去氧膽酸、牛磺膽酸鈉、鵝去氧膽酸、脫氧膽酸）基線分離良好，峰形尖銳對稱，直觀表明該色譜係統對這幾類結構相似的化合物具有優異的分離能力。圖3為係統適用性溶液及對應單標在SinoPak C18色譜柱上分離的疊加色譜圖，進一步證實了係統適用性溶液與對照品溶液中對應峰的一致性。

圖1. 係統適用性溶液在SinoPak C18色譜柱上分離的色譜圖

色譜峰，1-牛磺豬去氧膽酸，2-牛磺膽酸鈉，3-鵝去氧膽酸，4-脫氧膽酸

圖2. 係統適用性溶液及對應單標在SinoPak C18色譜柱上分離的疊加色譜圖

表1中的數據進一步驗證了該係統的合規性。各組分的理論塔板數均遠高於藥典不低於10000的要求；牛磺膽酸與牛磺豬去氧膽酸的分離度為2.55，鵝去氧膽酸與脫氧膽酸的分離度為6.13，均滿足藥典規定的分離度分別大於2.0和1.5的要求。這些結果證明，所用色譜係統完全符合2025版藥典方法對係統適用性的要求，能夠確保後續含量測定的準確性與可靠性。

表1. 係統適用性溶液色譜峰參數表

牛黃中6種主要成分對照品溶液測試

圖3為人工牛黃中六種關鍵膽酸對照品溶液在SinoPak C18色譜柱上的分離色譜圖，直觀驗證了方法的分離效能。圖中，牛磺膽酸鈉、甘氨膽酸、牛磺去氧膽酸、膽酸、豬去氧膽酸及甘氨去氧膽酸依次實現基線分離，峰形尖銳對稱。圖4為對照品溶液及對應單標在SinoPak C18色譜柱上分離的疊加色譜圖，進一步證實了各組分峰對應的一致性。

圖3. 牛黃中6種主要成分對照品溶液在SinoPak C18色譜柱上的分離色譜圖色譜峰，1-牛磺膽酸鈉，

2-甘氨膽酸，3-牛磺去氧膽酸，4-膽酸，5-豬去氧膽酸，6-甘氨去氧膽酸

圖4. 牛黃中6種主要成分對照品溶液在SinoPak C18色譜柱上分離的疊加色譜圖

表2中的數據進一步驗證了該係統的合規性。各成分的理論塔板數極高（例如膽酸峰超過200,000），分離度充分（如膽酸與豬去氧膽酸間分離度預計大於8.0），且拖尾因子優異（接近1.0）。這些數據表明所用色譜係統完全滿足藥典要求，具備高柱效、強分離能力和良好的峰形，為確保6種成分準確定量提供了可靠的方法學基礎。

表2. 牛黃中6種主要成分對照品溶液色譜峰參數表

3、總結

2025版《中國藥典》采用HPLC-ELSD法測定人工牛黃中多種膽酸類成分，方法科學、嚴謹。本文的驗證實驗表明，小黄鸭福利导航EClassical 3200係統結合SinoPak C18色譜柱能夠完美複現該方法，為藥品檢驗機構、製藥企業及相關研發單位提供了經過驗證的、可行的儀器配置與操作方案，有助於保障人工牛黃及其製劑的質量穩定與有效。