高效液相色譜（HPLC）是實驗室的“眼睛”，但流速不準會導致保留時間漂移、峰形變差、結果不可靠。本文將深入解析流速不準的六大原因，並提供完整的排查與解決方案，助您快速恢複儀器狀態，確保數據精準。

相關產品推薦：1、高效小黄鸭官网下载  2、超高效小黄鸭官网下载  3、製備小黄鸭官网下载  4、專用小黄鸭官网下载

一、症狀識別：您的HPLC流速真的不準嗎？

在深入原因前，請先確認是否出現以下症狀：

保留時間不穩定：同一方法，連續進樣保留時間持續提前或延後。

係統壓力異常：壓力過高、過低或劇烈波動（排除色譜柱和流動相因素後）。

峰形變差：出現前沿峰、拖尾峰或分叉峰。

定量結果重複性差：平行樣品的峰麵積或高度差異顯著。

二、六大核心原因深度解析與解決方案

1. 泵係統問題（常見根源）

單向閥故障：閥球汙染、磨損或卡住，導致溶劑輸送不連續。

解決方案：拆下單向閥，置於異丙醇中超聲清洗20分鍾；嚴重磨損需更換。

密封墊泄漏或磨損：泵頭密封圈老化，導致內部或外部泄漏。

解決方案：定期更換密封墊（通常每3-6個月或按泵衝數計），更換時用異丙醇清潔柱塞杆。

柱塞杆磨損或劃傷：影響泵的容積精度。

解決方案：檢查柱塞杆表麵，輕微磨損可拋光處理，嚴重則需更換。

比例閥故障（針對四元泵）：影響梯度洗脫的準確性。

解決方案：執行儀器自帶的比例閥測試和清洗程序。

2. 流動相與脫氣問題

溶解氣體未脫盡：流動相中的氣泡在泵或檢測器中形成空穴，導致流速不穩、壓力波動和基線噪音。

解決方案：充分脫氣！使用在線脫氣機，或采用氦氣脫氣、超聲脫氣至少15分鍾。確保儲液瓶濾頭浸沒，管路無泄漏入口。

流動相粘度變化：特別是使用不同比例混合溶劑時，環境溫度變化會導致粘度變化，影響流速穩定性。

解決方案：使用柱溫箱穩定溫度，對於敏感方法，考慮使用預混合流動相。

3. 管路與連接問題

管路堵塞：特別是進口濾頭、在線過濾器、保護柱或色譜柱入口篩板堵塞。

解決方案：分段排查。從泵出口開始，逐段斷開，觀察壓力變化。超聲清洗濾頭、篩板或更換過濾器。

微泄漏（尤其危險）：接頭鬆動、管路切割不平整導致肉眼難以發現的微小泄漏。

解決方案：用無塵布檢查各接頭是否有濕潤跡象。使用專用工具重新切割並緊固管路。

4. 儀器設置與校準問題

校準數據過期：長期未進行流速校準，儀器實際輸出與設定值產生偏差。

解決方案：定期執行流速校準。使用稱重法（收集流動相1分鍾，精密天平稱重）或流量計驗證實際流速，並在儀器軟件中錄入修正因子。

5. 軟件與控製故障

控製參數錯誤：方法文件中流速單位設置錯誤（如將mL/min誤設為μL/min）。

解決方案：仔細檢查方法參數，進行“傻瓜式”複查。

電子控製單元故障：泵驅動馬達或控製電路板故障（相對少見但嚴重）。

解決方案：聯係儀器廠家工程師進行專業診斷與維修。

6. 環境因素

實驗室溫度波動大：影響溶劑粘度和泵的機械性能。

解決方案：將HPLC放置在溫度穩定的環境中，避免空調直吹或陽光照射。

三、高效排查流程圖：一步步鎖定元凶

第1步：壓力觀察 → 壓力異常？是 → 檢查堵塞/泄漏/脫氣。

→ 壓力穩定但流速不準？進入第2步。

第2步：簡單測試 → 用稱重法測試實際流速。

→ 實測與設定值一致？是 → 問題可能在檢測器或色譜柱。

→ 不一致？進入第3步。

第3步：泵係統排查 → 執行泵衝洗和密封墊清洗程序，檢查單向閥。

第4步：校準與維護 → 進行流速校準，檢查並更新儀器維護記錄。

表1.HPLC流速異常排查速查表

四、預防性維護計劃：防患於未然

每日：檢查壓力穩定性，觀察有無泄漏，確保流動相足量且脫氣充分。

每周：用純水或甲醇高流速衝洗係統，清洗進樣針和樣品瓶。

每月：清洗或超聲清洗單向閥、在線過濾器，檢查密封墊狀態。

每季度：執行全麵的流速、梯度和壓力準確性校準。

每半年或按需：更換泵密封墊、柱塞杆等易損件。

表2.HPLC核心部件維護周期及要點表

HPLC流速不準並非單一問題，而是係統狀態的“警報”。通過係統性的排查——從簡單的流動相脫氣、管路連接到精密的泵係統維護與定期校準——您可以快速定位並解決問題，確保儀器始終處於佳工作狀態。

牢記：預防勝於治療。 建立並嚴格執行定期維護計劃，是保證實驗數據長期可靠、延長儀器壽命、降低總擁有成本（TCO）的高效投資。

常見問題（FAQ）：

問題一：為什麽我的液相色譜壓力顯示正常，但保留時間卻一直在往後漂移？這算流速不準嗎？

答： 這很可能是 “隱性”流速不準 的典型表現。雖然係統壓力穩定，但實際流速可能已低於設定值。

核心原因：常見的是 泵密封墊發生輕微內漏。溶劑從高壓端通過磨損的密封墊少量漏回低壓端，泵的實際輸出效率下降。由於泄漏量穩定，係統壓力可能看起來正常，但單位時間內送到色譜柱的流動相體積減少了，導致保留時間不斷延後。

解決辦法：

首要檢查：觀察泵頭是否有滲液。執行泵的“密封墊清洗”程序（用含一定比例水的溶劑，例如水:異丙醇=80:20，高流速衝洗）。

驗證：使用稱重法精確測量1分鍾內泵出的流動相重量，換算成體積，與設定流速對比。

終措施：如果確認流速偏低且密封墊清洗無效，更換新的泵密封墊。

問題二：我剛換了新柱子，壓力變得特別高，流速也好像上不去，是柱子堵了嗎？

答： 新色譜柱本身堵塞的可能性較低。壓力超高伴隨流速問題，更應優先排查 “柱外因素”。

核心原因：換柱過程中，可能導致了 管路微堵塞或連接不當。

管路堵塞：柱子入口管路或接頭處的 篩板/濾頭 可能因之前使用殘留的樣品或緩衝鹽沉澱而堵塞，換柱後在新柱的高背壓下問題凸顯。

接頭不當：使用了不匹配的接頭或擰得過緊，導致管路端口變形、產生死體積或碎屑，形成局部堵塞。

解決辦法：

隔離判斷：斷開色譜柱，直接將兩通連接泵與檢測器，用正常流速測試。若壓力正常，則問題在柱子或柱連接處；若壓力仍高，則問題在柱前係統（管路、過濾器等）。

分段排查：從泵開始，逐段斷開並檢查壓力和流速，定位堵塞點。

清洗/更換：超聲清洗堵塞的濾頭、篩板或更換該段管路。

問題三：我做梯度洗脫時，基線噪音大，而且保留時間重複性很差，這和流速有關嗎？

答： 高度相關，這通常是 梯度洗脫過程中流速不穩定 的綜合症狀。

核心原因：

脫氣不充分（主要）：梯度混合時，不同溶劑的混合可能促使溶解氣體析出形成微小氣泡。氣泡在泵、混合器或檢測器中造成壓力脈動和流速波動，導致基線噪音和保留時間飄忽不定。

比例閥故障（對於低壓四元泵）：控製不同溶劑通道開關的比例閥若出現堵塞或動作遲緩，會導致混合比例不準確，實際梯度與設定不符，本質也是流動相輸送的“流速”不準。

解決辦法：

徹底脫氣：確保所有通道的溶劑都經過充分脫氣（使用在線脫氣機，或超聲/氦氣脫氣）。

檢查泄漏：確保所有溶劑瓶的輸液管濾頭完全浸沒，各通道無氣體吸入點。

執行儀器維護：運行儀器的 “比例閥清洗” 程序，用高比例水相（如90%水）和異丙醇分別衝洗所有溶劑通道。

測試梯度準確性：可以通過不接色譜柱，用純水代替，運行梯度程序並在檢測器（示差或UV在低波長下）觀察基線台階變化，來初步判斷混合是否平滑、準確。